14 de abril de 2012

ISOLAMENTO DE CÉLULAS

Algumas técnicas foram criadas para separação de células e o cultivo destas em cultura (in vitro).




Caso a célula de interesse seja de um organismo multicelular, a primeira etapa será desfazer o tecido, isolando as células.

Isolamento




As enzimas Tripsina e colagenase catalizam a quebra de proteínas importantes da matriz extracelular e de proteínas de adesão, já o EDTA (Ácido EtilenoDiaminoTetraacetico) quela o Ca+2 (íon cálcio) que por sua vez é importante para adesão celular.


Na próxima etapa chamada de Refinamento as células podem ser isoladas de acordo com suas características.



Refinamento: Pode-se garantir uma melhor separação de certo tipo de célula utilizando algum tipo de interação especifica, como exemplo: anticorpos! Nesta imagem vemos um coluna, hoje em dia usa-se uns anticorpos conjugados a beads magnéticas, depois de ligar ao antígeno usa-se um imã e as células são separadas.




Ou ainda podem ser separadas num separador de células ativado por fluorescência (ex. Citometria de fluxo - FACS)



A suspensão de células passam por um afunilamento e um fluido garante que só passe 1 célula por vez, o vibrador mecanismo faz com que o fluxo de células forme gotas individuais. O sistema é ajustado de modo que há uma probabilidade baixa de ter mais de uma célula por gotícula. no detector. 

O laser incide sobre cada célula, parte dele atravessa a célula e chega a um detector (azul), este como pega todo o contorno da célula marca o tamanho da mesma (como se fosse tamanho da sombra). Mas o laser pode ser desviado ao se deparar com grânulos ou organelas, assim são detectados (roxo), revelando um complexidade celular interna.


Uma carga é colocada sobre o anel com base na medição da intensidade de fluorescência. Ao passar por placas carregadas de sinais opostos estes são desviados, as células negativas são atraídas pela placa positiva e assim conseguem se separar das demais células, e as positivas atraídas pela placa negativa. As células são encaminhadas a coletores individuais, viabilizando a separação de 1 célula. Este mecanismo é usado para muitas separações, até de células tronco usadas em humanos, um ressalve é que o sistema é estéril e como pode haver erros no caso de células tronco estes procedimentos são repetidos mais de uma vez para garantir a total separação de células individuais.




Outra técnica: Microdissecação a Laser



O tecido em cima de uma película fina de plastico é observado por microscopia e um laser (normalmente infravermelho) é utilizado para separar e isolar um grupo de células. 



Separação de Células exemplo

Duvidas ver google, pergunte por termos chave, na Wikipedia tem muita coisa boa.